蛋白質的定量測定實驗

蛋白質定量是生物化學、食品檢驗和其它生命學科zui常涉及的分析內容，是臨床診斷的重要指標，也是許多生物制品、藥物、食品質量檢測的重要指標。生化實驗中，在對生化藥品，特別是蛋白質、酶、某些多肽或蛋白質激素的分離純化時，對蛋白質進行準確可靠的定量分析是非常重要的。
    然而蛋白質的種類很多，結構不均一，分子量又相差很大，功能各異，這給建立一個理想而又通用的蛋白質定量分析的方法帶來了很大的困難。目前測定蛋白質含量的方法有很多種，不同的方法各有其特點。
    紫外分光光度法是根據(jù)蛋白質的物理性質來對蛋白質進行定量的；而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試根據(jù)蛋白質的化學性質來實現(xiàn)對蛋白質進行定量的；根據(jù)蛋白質的染色性質的不同，又建立了考馬氏亮藍染色法和銀染法；此外還有人在這些蛋白質定量方法的基礎上建立了熒光法。
    由于每種方法都有其自身的特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)牡鞍踪|測定方法，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果zui，但操作復雜，用于大批量樣品的測試則不太合格；雙縮脲法操作簡單，線性關系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應用受到限制；而酚試劑法彌補了它的缺點，它結合了雙縮脲法中銅鹽反應與Folin-ciocalteau試劑反應的特點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素較多；考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而簡便開始重新受到關注；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力較強，結果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎；而膠體金法具有較高的靈敏度，可達到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。