(提示:10-1為10的負一次方，即0.1;10-2為10的負二次方，即0.01)

第一步：系列稀釋

樣品稀釋液的制備 準確稱取待測樣品10g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液;以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。

用稀釋平板計數時，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時，采用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細菌數量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

第二步：涂步平板

平板接種培養(yǎng) 平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

(1)混合平板培養(yǎng)法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設置三個重復，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換)。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45-50℃的細菌培養(yǎng)液，輕輕轉動平板，使菌液與培養(yǎng)液混合均勻，冷凝后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計數。

(2)涂抹平板計數法 涂抹平板計數法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設三個重復)。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20-30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內，然后將平板倒轉，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數。