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        大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)酶聯免疫檢測
      2. 發布日期:2019-04-26      瀏覽次數:1559
        • 大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)酶聯免疫

                 檢測試劑盒使用說明書         AE94071Ra

          使用前仔細閱讀本說明書酶聯免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理,來檢測大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α),只能用于研究用途不得用于醫學診斷。

             用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中6-酮前列腺素F1α (6-keto-          PGF1α)測定。

          工作原理:

          本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)水平。向預先包被了大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠6-酮前列腺素F1α (6-keto-PGF1α)的濃度呈正相關。

           

          試劑盒組成 :

          試劑盒組成

          48孔配置

          96孔配置

          保存

          說明書

          1

          1

           

          封板膜

          2片(48

          2片(96

           

          密封袋

          1

          1

           

          酶標包被板

          1×48

          1×96

          2-8℃保存

          標準品160 ng/mL

          0.5ml×1

          0.5ml×1

          2-8℃保存

          標準品稀釋液

          3ml×1

          6ml×1

          2-8℃保存

          鏈霉親和素-HRP

          3 ml×1

          6 ml×1

          2-8℃保存

          生物素標記的抗6-keto-PGF1α抗體

          0.5ml×1

          1 ml×1

          2-8℃保存

          顯色劑A

          3 ml×1

          6 ml×1

          2-8℃保存

          顯色劑B

          3 ml×1

          6 ml×1

          2-8℃保存

          終止液

          3ml×1

          6ml×1

          2-8℃保存

          濃縮洗滌液

          20ml×20倍)×1

          20ml×30倍)×1

          2-8℃保存

           

          需要而未提供的試劑和器材:

          • 37恒溫箱。
          • 標準規格酶標儀。
          • 精密移液器及一次性吸頭
          • 蒸餾水,
          • 一次性試管
          • 吸水紙

           

          注意事項:

          • 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          • 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
          • 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
          • 免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜
          • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
          • 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

           

          洗板方法:

          手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。

          自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

           

          標本要求: 

          1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

           

          操作程序:

          • 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

          80ng/mL

          5號標準品

          120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

          40ng/mL

          4號標準品

          120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

          20ng/mL

          3號標準品

          120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

          10ng/mL

          2號標準品

          120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

          5ng/mL

          1號標準品

          120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

           

          • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
          • 加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗6-keto-PGF1α抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗6-keto-PGF1α抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘
          • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
          • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
          • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
          • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
          • 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
          • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

           

          操作程序總結:

          試劑盒性能:

          1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

          2.批內與批間應分別小于9%和15%

           

          檢測范圍:

          檢測范圍:3ng/mL 80ng/mL

           

          保存條件及有效期:

          保存:2-8

          有效期:6個月(2-8℃)。

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